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谷胱甘肽含量测定的常见原理

作者:山东金城生物药业有限公司 浏览: 发表时间:2021-04-14 16:45:50

谷胱甘肽含量测定的一般原则

谷胱甘肽是细胞中最重要的抗氧化剂巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护、氨基酸跨膜转运等方面发挥着重要作用。还原型与氧化型之比(GSH/GSSG)是反映细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞中GSH、GSSG含量及GSH/GSSG比值,可以很好地反映细胞的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

1. 谷胱甘肽还原测定原理:

谷胱甘肽与5.5′二硫代双-(2-致密亚麻酸)反应生成2-硝基5-苯硫醇甲酸和谷胱甘肽二硫键(GSSG)。2-硝基5-苯硫醇甲酸为黄色产物,在412nm处吸光最大,吸光度与谷胱甘肽含量成正比。

2. 氧化谷胱甘肽测定原理:

氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,也被称为二硫型谷胱甘肽。它是由两分子谷胱甘肽氧化形成的。GSSG被谷胱甘肽还原酶还原为谷胱甘肽,所以大多数谷胱甘肽以还原性形式存在于体内。

样品中原始的还原性谷胱甘肽被2-乙烯硝基苯抑制,然后通过谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH。谷胱甘肽可与5.5′-二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)反应生成2-硝基- 5-苯硫醇酸。在412nm处观察2-硝基5-苯硫醇羧酸的最大光吸收,以此来测定氧化谷胱甘肽的含量。

       

 

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